Метод пцр диагностики для выявления туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

  • Кровь.
  • Слюна.
  • Мокрота.
  • Выделения из половых органов.
  • Смывная жидкость бронхов.
  • Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

  1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
  2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
  3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

  • Длительный контакт с больным туберкулезом.
  • Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
  • Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
  • Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
  • ВИЧ-инфекция.
  • Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
  • Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

  • Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
  • Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
  • Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
  • Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
  • Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
  • Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

  • Зона приемки и сортировки проб.
  • Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
  • Зона проведения реакционных проб.
  • Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

  • Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
  • Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
  • ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
  • С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
  • Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
  • Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
  • Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
  • ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
  • Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Инновационный метод выявления микроорганизмов, в конце прошлого столетия изобретенный ученым Кэри Муллисом – анализ ПЦР. Он получил за свои труды Нобелевскую премию. Полностью этот процесс имеет название полимеразой цепной реакции. Он заключается в восстановлении типа микроорганизма в предоставленном биоматериале по коротким фрагментам ДНК. Это позволяет выявить инфицирование на ранней стадии и сразу начать лечение, не доводя до появления серьезных симптомов и осложнений.

Диагностика методом ПЦР заключается в получении сегментов патогенной ДНК из биологического материала и выстраивание их в правильную цепочку. Это позволяет идентифицировать микроорганизм, которому принадлежат клетки.

Процедура проводится в три этапа:

  1. Сбор биологического материала.
  2. Выявление и выстраивание ДНК.
  3. Распознавание инфекции.

Для этого исследования требуется специальное медицинское оборудование – амплификатор. Он оснащен камерой, где исследуемый материал взаимодействует с высокой температурой и химическими ферментами. На выходе лаборант имеет длинную цепочку ДНК возбудителя болезни, если таковой имеется в организме человека.

Анализ ПЦР – это сложный генно-инженерный процесс, требующий аккуратности и серьезного отношения, как от лаборантов, так и от пациентов. Большую роль в корректности результатов анализа играет подготовка к процедуре, то есть правильный сбор материала.

Основными источниками для получения информации о болезни являются:

Могут использоваться и другие варианты, жидкости при необходимости берутся на анализ из разных органов.

Для пациента предусмотрены определенные правила, которые нужно выполнять перед процедурой. Если предстоит анализ крови, то запрещается за 8 часов до сбора:

  • употреблять пищу;
  • курить;
  • пить алкогольные напитки;
  • принимать внутрь лекарственные средства.

Вечером перед сбором мокроты выпивается препарат для ее разжижения и облегчения отхаркивания. Утром собрать материал после тщательных гигиенических процедур полости рта.

Моча собирается в стерильную баночку утром натощак, после подмывания, до приема каких-либо медикаментов.

Если человек принимает антибиотики, то проведение анализа полимеразной цепной реакции следует отложить, иначе результат ПЦР не является достоверным. Сдавать мокроту или кровь следует спустя две недели после окончания курса лечения.

Если описать кратко, то процесс заключается в выделении части ДНК. Применение современных методов генной инженерии позволяет определить вид микроорганизма. Причем материала для анализа нужно небольшое количество.

Технически это очень сложная процедура, но она занимает меньше времени, чем классические бактериологические исследования. Возбудителей не нужно выделять из биоматериала, нет нужды растить их в течение нескольких недель. В день сдачи пациент уже может узнать результат своего анализа.

Весь процесс ПЦР протекает поэтапно:

  1. Ведется работа с первичной формой ДНК, которая при высокой температуре, близкой к 100 градусам, делится на две цепочки.
  2. Температура понижается, нити соединяются с фрагментами нуклеиновой кислоты – праймером.
  3. Происходит элонгация – синтез молекулярной структуры.

Весь сеанс состоит примерно из тридцати таких процедур, повторяющихся циклом как цепная реакция. Это необходимо для создания того количества клеток, при котором полученные бактерии станут распознаваемы.

Описание результата ПЦР (полимеразной цепной реакции) дает фтизиатр, она бывает простой или развернутой. В первом случае описание будет содержать только информацию о наличии или отсутствии палочки Коха. Если расшифровка подробная, из нее можно узнать степень распространения болезни, ее очаг. По этим критериям можно определить наиболее подходящее лечение туберкулеза в каждом случае.

Анализ полимеразой цепной реакции не различает живых и мертвых возбудителей, а говорит только об их наличии. Поэтому имеет смысл сдавать повторный тест на туберкулез только через 3-4 недели после прохождения назначенной врачом терапии.

Если результат положительный, на заключении ставится надпись «Mycobacterium tuberculosis». При отрицательном результате, рядом с биологическим названием бактерии есть пометка «не обнаружены». Анализы могут оказаться ложноположительными. Такое происходит редко – при нарушении техники выполнения исследований ПЦР или при наличии нежизнеспособных микроорганизмов. Окончательный вывод о заболевании может сделать только врач-фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза завоевала популярность по многим причинам. Она имеет массу достоинств, среди которых:

  1. Точность исследования. При проведении анализа с соблюдением технологии удается выявить бактерии, даже если они присутствуют в малом количестве.
  2. Быстрый результат. Весь процесс от сбора материала до готового заключения занимает около 5 часов. Если сравнить с посевом, его приходится ждать до нескольких недель.
  3. Полная безопасность для человека, в отличие от флюорографии с ее облучением.
  4. Используется любой жидкий биоматериал. Для осуществления ПЦР при туберкулезе легких наиболее точную информацию дает мокрота, при туберкулезном менингите берется образец из спинного мозга. Анализ крови помогает выявить местные очаги инфекции.
  5. Проверяется чувствительность бактерий к антибиотикам. Это позволяет назначить правильное лечение.
  6. Ранняя диагностика. Узнать о наличии заболевания можно до появления ее симптомов.

Кроме положительных моментов есть и недостатки. Главный из них – это цена. Анализ ПЦР не из дешевых, что связано с использованием дорогого оборудования. Еще один минус – необходимость выжидать время для проведения повторного теста после курса лечения от туберкулеза. Иногда результат проверки получается ложноположительным. Такое бывает из-за мутации бактерий.

ПЦР на туберкулез легких не имеет противопоказаний и абсолютно безопасен. Поэтому есть определенные ситуации и заболевания, когда это единственная возможность исследования.

  • беременность;
  • контакт с туберкулезным больным;
  • трудности в определении диагноза при заболевании легких;
  • обследование перед операцией;
  • аллергическая реакция;
  • ВИЧ-инфекция;
  • малолетний возраст.

Воспользоваться методом ПЦР можно по направлению, которое выдается в фтизиатрии, а также педиатром, терапевтом или пульмонологом.

Другие виды обследования не изжили себя, а продолжают использоваться. Их применяют в тех случаях, когда нет возможности выполнить ПЦР на туберкулез. К тому же современный метод неидеален, иногда его показатели подвергаются сомнению и требуют перепроверки.

Определить наличие туберкулеза у человека помогают следующие способы:

  • туберкулинодиагностика (Манту);
  • флюорография;
  • тестирование биологического материала на флору;
  • рентген легких.

Эти исследования являются бесплатными и доступными для каждого. Но у них есть свои недостатки:

  • Тест на туберкулез вызывает аллергию. Противопоказан при заболеваниях кожи.
  • Рентгенологические исследования сопровождаются облучением, что неприменимо к детям, людям с иммунодефицитом и беременным женщинам.
  • Бактериологические анализы занимают гораздо большее количество времени, результата можно ждать до месяца.

Альтернативные варианты не являются гарантией стопроцентно правильного заключения. Они чаще всего используются в профилактических целях. Диагностирование туберкулеза методом ПЦР дает наиболее достоверную информацию. Если есть возможность, то лучше воспользоваться именно им.

Ребенка следует особенно оберегать от заболевания – туберкулезная инфекция может нанести серьезный вред организму с еще не совсем сформировавшимся иммунитетом.

После попадания палочки Коха в детский организм развитие заболевания проходит такие стадии:

  • Латентная. Продолжается до года, не выдавая себя никакими симптомами.
  • Интоксикация. Сказывается на общем состоянии здоровья. Появляется слабость, апатия, отсутствие аппетита, сонливость и снижение работоспособности. Постоянно немного повышена температура.
  • Первичная форма заболевания. Туберкулез локализуется, образуя очаг заболевания. У ребенка возникает кашель, одышка, головная боль, увеличение лимфоузлов.
  • Туберкулезный бронхоаденит. Симптомами являются боль в лопатках, кашель с разной тональностью звука, хрипы.

Обычно для выявления инфекции под кожу ребенка вводится туберкулин. Если к этому виду обследования имеются противопоказания, то ПЦР на туберкулез – незаменимый вариант для диагностики. Дети обычно сдают анализ крови, но при необходимости собирается и мокрота. При малейшем подозрении на наличие туберкулез проводятся дополнительные исследования, чтобы убедиться в положительном результате и сразу начать лечение на ранней стадии, не допуская развития болезни.

Современные методы исследования всегда быстрее и надежнее. Жаль, что из-за дорого оборудования сделать такие анализы есть возможность не во всех медицинских учреждениях и населенных пунктах. Каким способом провести обследование обычно выбирает врач, но и у пациента есть право выбора. Если вам приходилось сдавать анализ ПЦР, расскажите об этом в комментариях. Если статья оказалась для вас полезной, поделитесь ей в соцсетях – возможно, она поможет вашим друзьям.

источник

Современные методы диагностики (пцр, диаскинтест, квантифероновый тест) обладают высокой эффективностью, но на практике исследования не проверены. Туберкулинодиагностика была основой для выявления инфицированных и больных людей.

Способ позволил выявить много больных людей, снизить статистику заболеваемости, смертности.

Посев на микобактерии и микроскопия мокроты по Цилю-Нельсону позволяет достоверно диагностировать инфекцию. Проблема вызывает точное взятие мокроты прямо из пораженного бронха. На фоне туберкулезного процесса поражается значительная часть бронхиального дерева. После бактериального посева возможно проведение пробы на чувствительность возбудителя к антибиотику.

После анализа результатом диагностики фтизиатрам стало ясно, что отсутствие выделения палочки Коха не означает отсутствие инфицирования организма. Возбудитель может определяться после второго, третьего, четвертого взятия материала.

Современные диагностические методы (дст, Квантифероновый тест) выявляют микобактерии при активном течении заболевания. При наличии микобактерий внутри лимфатических узлов, при внелегочных формах заболевания тесты чаще всего отрицательны.

Своевременная диагностика составляет основу предотвращение серьезных осложнений и опасных последствий заболевания.

Заменой классической туберкулинодиагностике является диаскинтест (дст). Согласно последним постановлениям исследование должно заменить стандартную пробу Манту, которая позволила выявить много случаев заболеваемости, инфицированности среди населения.

Суть диаскинтеста, как и туберкулинодиагностики, предполагает подкожное введение белков возбудителей туберкулеза. В ответ на инъекцию вырабатывается реакция гиперчувствительности со специфическими кожными изменениями: покраснение, уплотнение, образование пузырей.

Положительный результат диаскинтеста характерен для пациентов с активным течением заболевания. При инфицировании или повышенной аллергизации исследование будет отрицательным. Отрицательный эффект дст может быть результатом сильного иммунитета, но при инфицировании человека.

При сравнении с Манту диаскинтест является более универсальным и чувствительным способом диагностики туберкулеза. Отсутствие выявления инфицированности требует его применения одновременно с туберкулинодиагностикой.

Несмотря на результаты клинических испытаний дст, ученые утверждают об общей универсальности и чувствительности способа, нельзя считать исследование универсальным диагностическим решением.

Разработан тест академиками НИИ Сеченова. Отсутствие аллергии при использовании диаскинтеста объясняется подкожным введением видоспецифичных туберкулезных белков. После их введения определяется кожная реакция в виде покраснения, уплотнений.

Квантифероновый тест оценивается после взятия крови больного. Механизм действия процедуры заключается в определении гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами после встречи с микобактериями туберкулеза. Тесты определяют туберкулезные белки, которые содержат не только бактерии человечьего и бычьего типов. Квантифероновый тест можно использовать также для диагностики микобактериозов, провоцируемых другими микобактериями, которые формируют специфические изменения на рентгенограмме. Результат теста определяется в нескольких пробирках, что повышает диагностическую чувствительность метода.

Полимеразная цепная реакция – точный, но дорогостоящий метод диагностики туберкулеза. ПЦР проводится после бронхоскопии.

Рационально проведение полимеразной цепной реакции после получения отрицательных результатов. Результаты оцениваются после трехкратного посева мокроты на микобактерии туберкулеза. При самых благоприятных условиях выявление возбудителя свидетельствует об инфицированности. Назначение химиопрофилактики позволяет избежать активного туберкулезного процесса при наличии палочки Коха.

При получении штамма микроорганизма возможен посев на антибиотикочувствительность. Определение антибиотиков, способных уничтожать микроорганизмы, позволяет оценить, какими препаратами проводить лечение инфекции.

ПЦР у детей проводится при отрицательных результатах посева, но при наличии виража туберкулиновой пробы, визуализации рентгенологических признаков инфицирования, выявлении клинических симптомов текущей инфекции.

Полимеразная цепная реакция обеспечивает высокую точность (около 99%). Метод основан на амплификации нуклеиновых кислот. У микобактерий, вирусов и других микроорганизмов существуют уникальные последовательности нуклеотидов. Их диагностика позволяет выявить возбудителя заболевания.

Чувствительность пцр у детей менее низка, чем у взрослых. На практике выявлены следующие особенности полимеразной цепной реакции у ребенка:

Несмотря на высокую достоверность метода, получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулеза у детей. Более рационально использование способа у пациентов с иммунодефицитными состояниями. При диагностике внелегочных форм туберкулезной инфекции.

Ошибки при интерпретации определяется нарушениями при заборе и подготовке материала для исследования.

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

У детей пцр исследование применяется чаще вследствие скрытой локализации микобактерий внутри лимфоузлов, что приводит к получению отрицательных результатов при применении других способов диагностики. При бактериальном посеве достаточно выявления около 10 микроорганизмов. Нужно учитывать, что не все отвечают за активный туберкулез легких.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

  1. Хранить материал в стерильных пробирках;
  2. Исключать попадание других бактерий;
  3. При транспортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» характеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

  1. Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
  2. Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
  3. Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
  4. Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения характерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не характеризуется изменениями.

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

  1. Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
  2. При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
  3. Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Фтизиатры для диагностики туберкулеза у детей и взрослых используют следующие анализы:

  • Изучение анамнеза пациента (контакт с больным или носителем туберкулезной палочки). Определение социальных факторов риска помогает предположить возможное инфицирование;
  • Оценка туберкулиновой чувствительности (проба Манту) с PPD туберкулином в дозе 5-10 ТE. Оценка результата проводится через 48-72 часа;
  • Рентгенологическое исследование проводится у детей и взрослых при подозрении на туберкулез, вираже туберкулиновых проб;
  • Бактериологический посев является неопровержимым доказательством инфекции, спровоцированной микобактерий туберкулеза. При правильном сборе мокроты, обнаружении возбудителя в промывных водах желудка анализы на туберкулез можно считать положительными. Палочка Коха обнаруживается в гнойных абсцессах, лимфатических узлах, асцитическом выпоте, плевральном экссудате, моче, цереброспинальной жидкости;
  • Скорость оседания эритроцитов увеличивается при любой инфекции, в том числе туберкулезе;
  • ПЦР позволяет выявить специфического возбудителя, но исследование дорогостоящее;
  • Диаскинтест определяет легочный туберкулез, но часто дает отрицательные результаты при внелегочной локализации инфекции.

Современная диагностика туберкулеза при применении комплекса методов позволяет с высокой степенью достоверности определить микобактерию в организме. С помощью существующих способов выявляется активный процесс или инфицирование. Нужно лишь вовремя обратиться к специалистам!

источник

Абсолютно всем жителям важно знать симптомы и методы диагностики туберкулеза, а также иметь представление о лечении. Подавляющий процент жителей считает, что туберкулез – редкое заболевание, которому подвержены неблагополучные люди. Однако это не так. Распространенность возбудителей этого заболевания – микобактерий – в настоящее время растет и поражает новые слои населения.

Обследование на туберкулез заключается не только в проведении инструментальных методов исследования. В первую очередь врач должен провести тщательную беседу с пациентом, узнать его жалобы, динамику их развития. Основные симптомы, необходимые для определения наличия туберкулезного процесса:

  • Продолжительный кашель: сухой или с отделением мокроты;
  • Примеси крови в мокроте (кровохарканье);
  • Одышка;
  • Повышение температура тела, чаще всего до субфебрильной (37 – 37,5 0 С);
  • Нарушение общего состояния: повышенная утомляемость, за которой следует слабость;
  • Потливость во время подъема температуры.

Для определения наличия туберкулеза следует учитывать ряд других патологий органов дыхания, симптомы которых схожи с туберкулезом:

  • Пневмония (воспаление легких);
  • Бронхиальная астма;
  • Хронический обструктивный бронхит;
  • Новообразование в легких: доброкачественное или злокачественное.

Выше представлен список лишь наиболее распространенных заболеваний, в действительности их гораздо больше. Поэтому инструментальная и лабораторная диагностика туберкулеза играют такую важную роль.

Туберкулез – опасное заболевание, которое долгое время может находиться в организме в «спящем» виде. Перечисленные выше симптомы зачастую проявляются уже в запущенным случаях. Поэтому для предотвращения несвоевременного начала лечения особенно важной является ранняя диагностика туберкулеза.

Один из способов определения заболевания на ранних стадиях и предотвращения распространения туберкулеза – это проба Манту. Она заключается в подкожном введении туберкулина, что вызывает активацию иммунной системы организма и соответствующие реакции на коже. Проба Манту выполняется в школах один раз в году ученикам в одно и то же время. Выделяют следующие результаты реакции:

  • Отрицательный – след от укола;
  • Сомнительный – пятно или папула диаметром 2-4 мм;
  • Слабо положительный – диаметр от 5 до 9 мм;
  • Умеренный результат – 10-14 мм;
  • Выраженный – 15 мм;
  • Гиперергический – диаметр больше 17 мм для детей, подростков и взрослых.

Проба Манту дает и ложные результаты. Но данный метод обладает низкой стоимостью, доступностью и простотой выполнения, что и сделало его таким распространенным в учебных учреждениях.

Помимо традиционных способов диагностики наличия туберкулезного процесса в организме, есть более высокоэффективные, но в то же время более дорогостоящие методы исследования.

Используют такой диагностический метод, как «Диаскинтест». Основное его отличие от уже традиционной Манту в том, что здесь для подкожной реакции применяется не ослабленная туберкулезная палочка, как в туберкулине, а белок с антигеном возбудителя.

Отлично также то, что «Диаскинтест» показывает только инфекцию в активной форме, а при введении туберкулина обнаружение положительной реакции характерно и при наличии неактивных микобактерий.

Интерпретация результатов диагностики туберкулезного процесса при помощи «Диаскинтеста» проводится следующим образом:

  • Отрицательный результат – присутствует только точка от укола или синяк до 2 мм;
  • Сомнительная реакция – покраснение кожи;
  • Положительный результат – от 2 мм и больше.

Сомнительные результаты исследования должны насторожить врача, ребенка оставляют под наблюдением. При положительной реакции делается рентгенография органов грудной клетки и лабораторная диагностика для подтверждения диагноза.

Диагностика туберкулеза легких при помощи рентгенологического метода считается более традиционной, но она информативна лишь на более поздних стадиях заболевания. В качестве материала для ранней диагностики у взрослых в настоящее время чаще всего используют кровь.

Существует несколько методов исследования, с помощью которых можно определить наличие туберкулезного процесса:

  1. Общий анализ крови;
  2. Иммуноферментный анализ (ИФА) крови;
  3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) крови или других жидкостей;
  4. Квантифероновый тест.

Общий анализ крови не обладает высокой специфичностью. Его результаты позволяют лишь заподозрить диагноз. На вероятность инфицирования туберкулезом указывают такие изменения диагностического материала, как повышение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) и повышение уровня лейкоцитов (лейкоцитоз) преимущественно за счет лимфоцитов и моноцитов. Более специфичные методы – ИФА и ПЦР.

Суть иммуноферментного анализа заключается в обнаружении специфических антител к туберкулезу. В организме существует две группы антител: IgG и IgM. Обнаружение первой группы свидетельствует о хронической инфекции или о том, что человек переболел туберкулезом в прошлом. Если результаты показывают увеличение IgM, в организме присутствует острый активный туберкулез.

Метод ПЦР имеет высокую чувствительность. Это обозначает, что анализ ПЦР позволяет определить даже наименьшее количество микобактерий туберкулеза.

Диагностика туберкулеза у взрослых при помощи ПЦР крови – наиболее эффективный метод ранней постановки диагноза. Он относится к молекулярно-генетическим методам исследования и используют для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза. Анализ предполагает использование такого материала, как кровь, моча, спинномозговая жидкость, лимфа.

Кроме непосредственно постановки диагноза, ПЦР используют для определения чувствительности микобактерий к препаратам. Традиционно для этого используют метод посева на питательные среды, но этот анализ имеет недостаток – результат приходит через долгое время. ПЦР же дает быстрые результаты. Чувствительность туберкулезных палочек к препаратам с помощью ПЦР выявляется путем определения мутаций в определенных генах.

Большее распространение по сравнению с ПЦР и ИФА в наше время получила аппаратная диагностика туберкулеза легких у взрослых. Это такие методы диагностики, как:

  • Флюорография;
  • Рентгенография органов грудной полости;
  • Компьютерная томография.

Все перечисленные выше исследования относятся к группе рентгенологических методов. Это значит, что получение изображения основывается на прохождении рентгеновских лучей через внутренние органы и отражении этих лучей.

Хотя суть этих методов одинакова, каждый из них имеет свои нюансы. Флюорография – самый дешевый способ аппаратной диагностики туберкулеза легких. Он требует меньшее количество материала для проявления и не нуждается в специальном инструментарии. Изображение отображается сразу на компьютере.

Метод флюорография получил широкое распространение в профилактических целях, для массового определения туберкулеза на ранних стадиях.

Рентген — более информативный метод аппаратного исследования, чем флюорография. Если после проведения флюорографии врач заподозрил наличие туберкулеза, он должен направить таких больных на обзорную рентгенографию органов грудной клетки.

Рентген выполняется в двух проекциях: боковой и прямой. Это еще одно его преимущество, ведь в боковой проекции можно увидеть патологию, которая в прямой проекции не видна из-за тени сердца.

Но наиболее эффективный метод при диагностике туберкулезного процесса в наше время – это компьютерная томография. Этот метод обследования не только дает возможность четко увидеть локализацию туберкулеза, но и оказывает наименьшую лучевую нагрузку на системы органов. Но данный анализ имеет существенный недостаток – это ее высокая стоимость. Поэтому назначается томография лишь в спорных ситуациях, когда данные флюорографии и рентгена не дают возможность поставить точный диагноз.

Формы туберкулезного процесса выделяются для того, чтобы можно было спрогнозировать дальнейшее течение заболевания, узнать хронический это процесс или острый, первичное или вторичное инфицирование больных. Выделяют следующие формы заболевания:

  • Первичный туберкулез;
  • Инфильтративная форма;
  • Очаговая;
  • Диссеминированная;
  • Кавернозная;
  • Фиброзно-кавернозная;
  • Цирротическая.

Первичный туберкулез встречается у детей и пожилых людей. Эта форма благоприятна для восстановления системы дыхания. Проходит без существенных остаточных явлений в легких, возможно образование очагов накопления кальция (очагов Гона), которые видны на рентгене, как ярко белые точечки.

Данные виды заболевания встречаются у взрослых больных и свидетельствуют об острой стадии туберкулезного процесса. Наиболее распространена инфильтративная форма, которая встречается в 65% случаев. На рентгене она видна в качестве затемнения с неравными контурами диаметром более 1 см. Если диаметр тени меньше, такой туберкулез называется очаговым.

Диссеминированный туберкулез также проявляется образованием мелких теней. Основное отличие этих форм заключается в том, что для очагового туберкулеза характерны единичные очаги, расположенные с одной стороны в верхних отделах легкого. Они имеют разную форму и плотность. При диссеминированном типе очаги занимают всю поверхность дыхательной системы, имеют практически одинаковую круглую форму.

Данные типы заболевания определяются на рентгене при хроническом течении туберкулезного процесса. Клинически такие формы проявляются чередованием обострения и ремиссии, когда больных ничего не беспокоит.

Картина рентгенологического исследования при кавернозном и фиброзно-кавернозном туберкулезном процессе схожа между собой. Они характеризуются наличием полостей в верхних отделах легких, причем полость при фиброзно-кавернозной форме имеет более толстую стенку. Это связано с более длительным течением заболевания и разрастанием соединительной ткани вокруг распавшейся легочной ткани. Цирротическая форма проявляется массивным затемнением, занимающим большую часть системы органов дыхания.

Прогноз для больных при данных формах заболевания неблагоприятный. Они требуют более длительного лечения, чем острые формы. Диагностированный туберкулез может потребовать терапии продолжительностью до двух лет.

Анализ мокроты при туберкулезе легких – один из наиболее информативных и доступных методов диагностики туберкулеза. Применять эти методики следует для определения возбудителей туберкулеза – палочек Коха. Существует два основных метода исследования мокроты:

  1. Микробиологический метод;
  2. Микроскопия мокроты.

Микробиологическое определение туберкулеза заключается в посеве мокроты на питательных средах, где наблюдают за ростом микобактерий. В зависимости от результата микробиологической реакции больной туберкулезом может выделять или не выделять бактерии. Диагноз, выявленный таким способом, помогает установить заразность больных для окружающих. По статистике 70% пациентов относятся к активным выделителям микобактерий.

Основным недостатком микробиологического метода диагностики является продолжительность роста бактерий на питательных средах. Это может занять более одной недели.

Поэтому наравне с посевом применяется анализ микроскопии мокроты. Это доступный метод, не требующий больших затрат времени и денег.

Диагностическая ценность выращивания бактерий на питательных средах зависит от правильности сбора материала для реакции, его хранения и транспортировки.

Мокрота должна быть собрана в специально оборудованном помещении, упакована в стерильный флакон с плотной крышкой, из ударостойкого материала во избежание реакции с пылью.

Кроме того, чтобы результаты определения возбудителя были максимально правдивыми, следует придерживаться определенной системы:

  • Проводить сбор материала до назначенного лечения;
  • Обследование делать натощак утром;
  • Нужно собрать минимум 3 пробы мокроты;
  • Исследование мокроты проводится в течение 3 дней подряд;
  • Если немедленно доставить мокроту в лабораторию не представляется возможным, ее следует хранить в холодильнике с температурой 4 градуса по С, до 2 дней.

Исследование мокроты больных эффективно только при легочной форме, если же туберкулез имеет иную локализацию, возможен посев на питательных средах следующего материала:

  • мочи, спермы и секрета простаты у мужчин, менструальной крови у женщин – при мочеполовом туберкулезе;
  • гной из абсцессов костей – при туберкулезе костей;
  • гной из лимфатических узлов – при туберкулезе лимфатической системы.

Взятие мочи наименее проблематично для посева на питательных средах при мочеполовом туберкулезе. Перед сбором материала следует обмыть внешние половые органы. Наилучшие результаты могут быть получены, когда используют среднюю порцию утренней мочи. У женщин она собирается при помощи катетера, у мужчин – естественным образом.

Правила сбора гноя на анализ из абсцессов костей и лимфатических узлов одинаковы. Делается пункция при помощи стерильной системы для забора крови. Следует тут же провести анализ в лаборатории. Там при помощи пипетки набирается 2-5 мл гноя, смешивается с 0,9% раствором натрия хлорида в количестве 2-3 мл. Смесь перемещается во флакон, взбалтывается в специальном аппарате и поддается исследованию.

Для успешного лечения от микобактерий туберкулеза следует придерживаться ряда следующих принципов:

  • начинать терапию нужно как можно раньше;
  • лечение должно быть длительным – минимальный срок терапии составляет 6 месяцев и при необходимости может продлеваться до нескольких лет;
  • непрерывность – прием препаратов каждый день или при интермиттирующем режиме – через день, 2-3 раза в неделю;
  • комплексность – одновременно назначают 4 препарата;
  • правильность проведения терапии должна контролироваться врачом.

Наиболее эффективные препараты для лечения туберкулеза представлены ниже:

Данные медикаменты еще называют препаратами лечения первой линии. Прием этих лекарств согласно перечисленным выше принципам дает наилучшие результаты и повышает шансы больных на полное избавление от микобактерий.

Из предыдущего раздела видно, что одним из принципов лечения туберкулеза является ранее начало терапии. Ведь при несвоевременном начале состояние больных ухудшается, и могут возникнуть такие осложнения:

  • Легочное кровотечение;
  • Недостаточность сердечно сосудистой системы – несостоятельность сердца и сосудов, что приводит к уменьшению поступления кислорода органам и ухудшению их функции;
  • Спонтанный пневмоторакс – состояние, при котором воздух попадает в плевральную полость вокруг легких;
  • Ателектаз легкого – спадание альвеол (дыхательных мешочков), что приводит к ухудшению функции дыхательной системы;
  • Плеврит – воспаление плевры (оболочки, покрывающей легкие).

Все профилактические меры можно разделить на две подгруппы:

Специфическая профилактика подразумевает под собой вакцинацию. Согласно «Национальному календарю профилактических прививок» ее проводят на 3-7 день жизни ребенка. Ревакцинация делается в 7 лет.

Неспецифическая профилактика для детей заключается в регулярном проведении пробы Манту, а для взрослых – прохождении флюорографии 1 раз в год.

Для людей, которые контактировали с больным туберкулезом или для больных в прошлом, особое значение имеет химиопрофилактика. Противотуберкулезный препарат «Изониазид» принимается в течение 6 месяцев.

Надеемся, вам понравилась статья про методы диагностики туберкулеза. Если вы знайте, какими еще способами можно выявить наличие микобактерий, расскажите об этом в комментариях. Делитесь этой статьей в социальных сетях, ведь туберкулез – опасная болезнь, о которой должен знать каждый.

источник

Понравилась статья? Поделить с друзьями: